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AAV 重慶宣尊生物科技有限公司
慢病毒

慢病毒

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簡介

       慢病毒載體(lentivirus vector,LV)屬于逆轉錄病毒科(Retrovidae),為 RNA病毒。區別一般的逆轉錄病毒載體,它對分裂細胞和非分裂細胞均具有感染能力。慢病毒載體的研究發展得很快,研究的也非常深入。該載體可以將外源基因有效地整合到宿主染色體上,從而達到持久性表達。
       感染能力方面可有效地感染神經元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內皮細胞、干細胞等多種類型的細胞,從而達到良好的的基因治療效果,在美國已經開展了臨床研究,效果非常理想,因此具有廣闊的應用前景。

優勢

慢病毒與其他病毒工具比較,具有以下優勢:
1) 表達時間長:慢病毒通過將外源基因整合到宿主細胞基因組上,可實現目的基因長時間穩定的表達,不隨著細胞分裂傳代而丟失,是細胞實驗的首選;
2) 安全性高:未發現致病性,已被用于CAR-T 治療作用于人體;
3) 免疫原性低: 直接注射活體組織不易造成免疫反應,適用于動物實驗。
不同病毒的生物學特性比較
載體選擇
  宣尊生物擁有豐富的慢病毒產品,用于操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA,如下慢病毒載體可供您選擇(不限于此列表):
調控方式載體編號載體名稱(載體元件順序)真核抗性熒光啟動子默認標簽載體容量
   過表達GL127pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-WPREN/AEGFPCMV3FLAG4.8kb
GL121pSLenti-EF1-EGFP-CMV-MCS-WPREN/AEGFPCMVN/A4.4kb
GL129pSLenti-CMV-mCherry-3xFLAG-WPREN/AmCherryCMV3FLAG4.8kb
GL119pSLenti-CMV-MCS-3xFLAG-PGK-Puro-WPREPuroN/ACMV3FLAG4.4kb
GL120pSLenti-SFH-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPREPuroEGFPCMV3FLAG3.5kb
GL107pSLenti-EF1-EGFP-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPREPuroEGFPCMV3FLAG3.7kb
GL109pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS-WPREPuroEGFPCMVN/A3.8kb
GL122pSLenti-EF1-EGFP-F2A-BSR-CMV-MCS-WPREblasticidinEGFPCMVN/A3.9kb
GL130pSLenti-CMV-EGFP-3xFLAG-PGK-Puro-WPREPuroEGFPCMV3FLAG3.7kb
GL132pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-WPRE2-CMV-MCSPuroEGFPCMVN/A3.7kb
GL123pSLenti-EF1-mCherry-P2A-Puro-CMV-MCS-3xFLAG-WPREPuromCherryCMV3FLAG3.7kb
GL125pSLenti-CMV-mCherry-3xFLAG-PGK-Puro-WPREPuromCherryCMV3FLAG3.7kb
GL133pSLenti-EF1-mCherry-F2A-Puro-WPRE2-CMV-MCSPuromCherryCMVN/A3.7kb
H114pLenti-CMV-Luc2-IRES-Puro-WPREPuroN/ACMVN/A2.2kb
GL124pSLenti-EF1-Luc2-F2A-Puro-CMV-MCS-WPREPuroN/ACMVN/A2.8kb
 表達creH126pLenti-CMV-NLS-Cre-3xFLAG-WPREN/AN/ACMV3FLAG3.9kb
H15108pLenti-CMV-DIO-MCS-WPREN/AN/ACMV3FLAG5.3kb
三標H7656pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-mNeonGreen-F2A-Puro-WPREPuromNeonGreenCBh3FLAG1.3kb
H7657pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-tdTomato-F2A-Puro-WPREPurotdTomatoCBh3FLAG0.6kb
H9911pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-mNeonGreen-F2A-BSR-WPREblasticidinmNeonGreenCBh3FLAG1.5kb
H9912pLenti-CBh-3xFLAG-Luc2-tCMV-tdTomato-F2A-BSR-WPREblasticidintdTomatoCBh3FLAG0.8kb
circRNA過表達H8384pLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-S-circRNA-WPREN/AEGFPCMVN/A3.0kb
H8807pLenti-CMV-S-circRNA-WPREN/AN/ACMVN/A4.8kb
H8399pLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-L-circRNA-WPREPuroEGFPCMVN/A1.0kb
H8810pLenti-CMV-L-circRNA-WPREN/AN/ACMVN/A2.8kb
miRNA過表達GL109pSLenti-EF1-EGFP-F2A-Puro-CMV-MCS-WPREPuroEGFPCMVN/AN/A
H3919pCLenti-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPREPuroEGFPU6N/AN/A
H119pLenti-CMV-TurboGFP-IRES-Puro-miR30(miRNA)-WPREPuroTurboGFPCMVN/AN/A
H3928pCLenti-U6-miR30(miRNA)-CMV-mCherry-F2A-Puro-WPREPuromCherryU6N/AN/A
H146pCLenti-EF1-Puro-CMV-EGFP-3xFLAG-Sponge(miRNA)-WPREPuroEGFPCMV3FLAGN/A
H7505pCLenti-U6-TuD(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-BSR-WPREblasticidinEGFPCMVN/AN/A
H7506pCLenti-U6-TuD(miRNA)-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPREPuroEGFPCMVN/AN/A
過表達(Tet-on)H125pLenti-TRE-EGFP-EF1-rtTA3-IRES-Puro-WPREPuroEGFPTREN/A2.0kb
H121pLenti-TRE-EGFP-3xFLAG-PGK-Puro-WPREPuroEGFPTRE3FLAG3.3kb
H2057pLenti-EF1-rtTA3-IRES-Puro-WPREPuroN/AEF1N/AN/A
shRNA干擾GL401pCLenti-U6-shRNA-CMV-Puro-WPREPuroN/AU6N/AN/A
GL404pCLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-WPREN/AEGFPU6N/AN/A
GL427pSLenti-U6-shRNA-CMV-EGFP-F2A-Puro-WPREPuroEGFPU6N/AN/A
GL428pSLenti-U6-shRNA-CMV-mCherry-F2A-Puro-WPREPuromCherryU6N/AN/A
H7615pCLenti-U6-shRNA-CMV-mCherry-F2A-BSR-WPREblasticidinmCherryU7N/AN/A
CRISPR敲除H5070pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-spCas9-WPREPuroN/AU6N/AN/A
H7072pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-BSR-P2A-3xFLAG-spCas9-WPREblasticidinN/AU6N/AN/A
H6825pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9-WPREN/AsfGFPU6N/AN/A
H5068pLenti-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFP-WPREN/AEGFPU7N/AN/A
H5450pLenti-CMV-Puro-P2A-3xFLAG-espCas9_1.1-WPREPuroN/ACMV3FLAGN/A
CRISPRa轉錄激活H9517pCLenti-U6-gRNA-MS2-EFS-dCas9-VP64-T2A-BSD-WPREblasticidinN/AU6N/AN/A
E2577pCLenti-EF1a-MCP-P65-HSF1-T2A-Hygro-WPREhygromycinN/AEF1aN/AN/A
H7284pCLenti-U6-gRNA-2x(wt+f6)MS2-CMV-MCP-P65-HSF1-IRES-BSR-WPREblasticidinN/AU6/CMVN/AN/A
H7281pLenti-CMV-dCas9-VP64-T2A-Puro-WPREPuroN/ACMVN/AN/A


應用

1)將目的基因?/RNAi?基因轉入難以轉染的細胞,比如神經元細胞、干細胞或其它原代細胞;
2)將目的基因?/RNAi?基因轉入動物組織,以期獲得長期表達;
3)構建穩定表達目的蛋白?/RNAi?的細胞系,再用exvivo的方法導入動物體內;
4)基因治療;
5)轉基因動物;?
6)基因敲除;
7)藥物研究:構建表達受體蛋白的細胞系,研究藥物的作用;?
8)快速建立生產目的蛋白的細胞系,非常有前途的真核細胞表達方法。


 




  常見MOI列表
細胞名中文名稱慢病毒感染MOI
(參考值)
MGC80-3人胃癌細胞10
HT-29人結腸癌細胞20
RKO人結腸腺癌細胞10
Caki-1人腎透明細胞癌皮膚轉移細胞10
5637人膀胱癌細胞10
U-118 MG人腦星形膠質母細胞瘤10
RWPE-1人正常前列腺上皮細胞20
HeLa人宮頸癌細胞10~20
Ca Ski人宮頸癌腸轉移細胞10
MCF7 [MCF-7]人乳腺癌細胞10
A549人非小細胞肺癌細胞10
NCI-H1299人非小細胞肺癌細胞20
U-87 MG人腦星形膠質母細胞瘤10
U251人膠質瘤細胞10
A172人膠質母細胞瘤細胞10
K-562人慢性髓原白血病細胞10
HL-60人原髓細胞白血病細胞10
GES-1人胃上皮細胞20
U266人骨髓瘤細胞20
CAL 27人舌鱗癌細胞20
PC9人肺癌細胞5
PC14人肺癌細胞10
MADB-106大鼠乳腺癌細胞20
F98大鼠腦膠質瘤細胞20
MHCC-97H人肝癌細胞(高轉移)10~20

 
  MOI 是multiplicity of infection 的縮寫,即感染復數,其含義是感染時病毒與細胞的數量比值,一般以實驗中某個細胞,感染達到80%,定義為這個細胞的MOI值,即病毒量與細胞數的比值;加的病毒量(μl)=細胞數×MOI/滴度(…/ml) ×1000


慢病毒在腫瘤研究中的應用案例
 
1.Nature Communications. (IF=12.353). Shi Y,et.al. (2017). Tumour-associated macrophages secrete pleiotrophin to promote PTPRZ1 signalling in glioblastoma stem cells for tumour growth.[慢病毒, 膠質細胞瘤]
慢病毒干擾: Lenti-shNT/shPTN/shPTPRZ1
2. Hepatology. (IF=14.079). Ma JZ,et.al. (2016). METTL14 suppresses the metastatic potential of HCC by modulating m6 A-dependent primary miRNA processing. [慢病毒, 肝癌]
慢病毒過表達/干擾pLV-CMV-PGK-EGFP-T2A-puro/ pLV-U6-shRNA-CMV-EGFP-T2A-puro
 
慢病毒在神經系統的應用(在體注射
1.Nature Neuroscience. (IF=19.912). Ding XL,et.al. (2017). Activity-induced histone modifications govern Neurexin-1 mRNA splicing and memory preservation. [慢病毒, 學習與記憶]
病毒類型:慢病毒
載體名稱:LV-Suv39h1-RNAi(不確定詳細的)
注射部位:海馬DG區
病毒注射量:2 μL,9.98 × 108 TU/mL
檢測時間:2周
 
2.Nature Communications. (IF=12.353). Yao XH,et.al. (2016). Electrical coupling regulates layer 1 interneuron microcircuit formation in the neocortex. [慢病毒, 神經環路]
病毒類型:慢病毒
載體名稱:LV- CX36-shRNA-EGFP(不確定詳細的)
注射部位:P1小鼠新皮層L1
病毒注射量:1μL
檢測時間:2周
3.Molecular Psychiatry. (IF=11.64). Guo DJ,et.al. (2019). Autism-like social deficit generated by Dock4 deficiency is rescued by restoration of Rac1 activity and NMDA receptor function. [慢病毒, 自閉癥]
 
病毒類型:慢病毒
載體名稱:Lenti-CMV-EGFP-P2A-3FLAG-Rac1
注射部位:小鼠海馬CA1區
病毒注射量:1μL
檢測時間:4周
 
慢病毒延伸服務
 
宣尊生物慢病毒的生產和質控采取了國際學術界公認的標準流程,采用三質?;蛩馁|粒系統在293T細胞中進行包裝。所獲得的病毒顆粒經過超速離心純化,并通過qPCR對病毒基因拷貝進行滴定。一般情況下我們的慢病毒的滴度在108~109TU/ml,完全可以滿足各類實驗的使用要求。

 



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