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腺病毒ADV

腺病毒ADV

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腺病毒(Adenovirus, ADV)是一種無包膜的線性雙鏈DNA病毒,具有廣泛的細胞和組織感染能力。感染過程劇烈,適于短時間內進行基因高表達的實驗,與其它病毒相比,腺病毒優勢在于插入片段較長,表達活性強。

  體外應用時,腺病毒載體轉基因效率高(接近100%的轉導效率),且可轉導不同類型的細胞,對于大量難轉染細胞的基因遞送是一個很好的工具。但是,在體內應用時,由于腺病毒免疫原性強,感染劇烈,故常會引起動物局部組織炎癥反應和機體免疫反應,對動物體征和實驗結果的客觀性造成影響。

ADV包裝和侵染過程

腺病毒包裝與純化

  
腺病毒包裝骨架達質粒與穿梭質粒共轉染HEK-293細胞,待細胞出現CPE狀態后通過收集細胞上清和細胞裂解物,通過濃縮或氯化銫密度梯度離心純化病毒。 
  CPE(Cytopathic Effect):病毒對組織培養細胞侵染后產生的細胞變性,利用此種病變效應可進行病毒定量。
 

腺病毒滴度檢測

 
    檢測方法:酶聯免疫法腺病毒滴度測定,根據計算感染后染成褐色的陽性細胞數,來計算病毒滴度。
       實驗原理:腺病毒感染的陽性細胞表達的衣殼蛋白被染成褐色。
       檢測方法:免疫顯色方法
       實驗原理:通過抗5型腺病毒外殼蛋白的單抗與待感染腺病毒樣品的細胞結合,再用HRP標記的二抗與一抗結合,經顯色液顯色,被感染的細胞變成褐色,根據陽性細胞數,來計算病毒滴度。

腺病毒載體優勢

     
      ① 表達快,腺病毒感染細胞后,1-2天即可表達
       ② 載體容量大,感染效率高,常用于感染難感染的細胞
       ③ 不整合到染色體中,無插入致突變性
       ④  具有嗜肝性,易于感染肝細胞,腺病毒的體內應用是用于感染肝臟
    不過由于腺病毒免疫原性高,對某些對外源刺激敏感的動物模型和組織中易造成炎癥,體內應用需謹慎。

不同病毒的生物學特性比較

載體選擇
  和元生物擁有豐富的腺病毒產品,用于操作編碼基因和非編碼基因,如lncRNA、microRNA、circRNA。
       以下腺病毒載體可供您選擇:
調控方式載體編號載體名稱(載體元件順序)真核抗性熒光啟動子默認標簽載體容量
過表達H225pADV-mCMV-MCS-3xFLAGN/AN/AmCMV3FLAG>6kb
H201pADV-mCMV-EGFP-3xFLAGN/AEGFPmCMV3FLAG>5kb
H213pADV-mCMV-3xFLAG-EGFPN/AEGFPmCMV3FLAG>5kb
H221pADV-mCMV-3xFLAG-P2A-EGFPN/AEGFPmCMV3FLAG>5kb
H204pADV-mCMV-mCherry-HAN/AmCherrymCMVHA>5kb
H222pADV-mCMV-3xFLAG-T2A-mCherryN/AmCherrymCMV3FLAG>5kb
H12588pADV-EF1-mNeonGreen-CMV-MCS-3xFLAGN/AmNeonGreenCMV3FLAG>4kb
H12589pADV-EF1-mScarlet-CMV-MCS-3xFLAGN/AmScarletCMV3FLAG>4kb
circRNA過表達H6946pADV-CMV-S-circRNAN/AN/ACMVN/A>5kb
miRNA過表達H216pADV-U6-miR30(miRNA)-CMV-EGFPN/AEGFPU6N/AN/A
表達creK0024 pADV-CMV-CreN/AN/ACMVN/AN/A
干擾DKD001pADV-U6-shRNA-CMV-EGFPN/AEGFPU6N/AN/A
DKD004pADV-U6-shRNA-CMV-mCherryN/AmCherryU6N/AN/A
CRISPR敲除H5064pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-3xFLAG-spCas9N/AN/AU63FLAGN/A
H9350pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-sfGFP-P2A-3xFLAG-spCas9N/AsfGFPU63FLAGN/A
H5066pADV-U6-spgRNA v2.0-CMV-EGFPN/AEGFPU6N/AN/A
H218pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-spCas9N/AmCherryCMV3FLAGN/A
H5449pADV-CMV-mCherry-P2A-3xFLAG-eSpCas9_1.1N/AmCherryCMV3FLAGN/A
  
 

應用實例

  1.Hepatology. (IF=14.079). Zhou YF,et.al. (2018). Cystathionine β-synthase is required for body iron homeostasis. [腺病毒, 肝臟]
  
  感染部位:肝臟
  
  載體名稱:Ad-CBS
  
  注射方式:尾靜脈
  
  注射量:1 x1011 PFU/mL,10ul
  
  檢測時間:7天
  
  2. Diabetes. (IF=8.095). Xiao Y Z,et.al. (2015). Activation of ERK1/2 ameliorates liver steatosis in leptin receptor deficient (db/db)mice via stimulating ATG7-dependent autophagy. [腺病毒, 肝臟]
  
  感染部位:肝臟
  
  載體名稱:Ad-ATG7
  
  注射方式:尾靜脈
  
  注射量:1 x10PFU /只
  
  檢測時間:10天
  
  3. Molecular Neurobiology. (IF=5.397). Guo J,et.al. (2015). Overexpression of Fibulin-5 Attenuates Ischemia/Reperfusion Injury After Middle Cerebral Artery Occlusion in Rats. [腺病毒, 大鼠]
  
  注射部位:大鼠大腦皮層
  
  載體名稱:Ad-FBLN
  
  注射方式:腦立體定位注射
  
  注射量:三種不同劑量
  
  檢測時間:7天
  
  和元生物腺病毒的生產和質控采取了國際學術界公認的標準流程,采用AdEasy及Admax腺病毒包裝系統在HEK-293細胞中進行包裝。所獲得的病毒顆粒經過超速密度梯度離心和過濾,并通過殼蛋白免疫法進行滴度測定。一般情況下腺病毒的滴度在1010~1011pfu/ml,完全可以滿足各類實驗的使用要求。




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